ODN1826：从TLR9激动剂到抗肿瘤免疫新锐的应用全景

一、分子身份与作用机制

ODN1826（CAS：202668-42-6）是一条20 mer的B类CpG寡脱氧核苷酸，序列为DNA, d(P-thio)(T-C-C-A-T-G-A-C-G-T-T-C-C-T-G-A-C-G-T-T)，采用全硫代磷酸骨架修饰以抵抗核酸酶降解。作为小鼠TLR9的特异性激动剂，ODN1826本身并不直接激活人TLR9，这一物种特异性在实验设计中需要特别注意。

其作用机制的核心在于内体定位的TLR9识别。ODN1826经内吞进入细胞后，在酸性内体环境中与TLR9结合，触发TIR结构域构象变化，继而招募MyD88衔接蛋白。下游信号通过IRAK1/4-TRAF6级联放大，分叉激活两条关键通路：NF-κB通路驱动IL-6、IL-12、TNF-α等促炎细胞因子转录；IRF7通路则负责I型干扰素的诱导。这种双通路激活模式赋予了ODN1826同时调动先天免疫与适应性免疫的能力。值得注意的是，B类CpG ODN的免疫刺激谱以B细胞激活和单核细胞成熟为主，I型干扰素诱导能力相对较弱，这与A类ODN形成鲜明对比。

二、细胞实验应用

2.1 巨噬细胞激活与功能重塑

RAW264.7小鼠巨噬细胞系是ODN1826最经典的体外模型。当使用1 μg/mL ODN1826处理24小时，细胞表现出强烈的M1型极化特征：NO产量在Griess反应中显著升高，最低有效浓度可低至0.05 μg/mL，1 μg/mL达到平台期；iNOS蛋白表达同步上调，且这一效应不依赖TNF-α的自分泌反馈——即使加入TNF-α中和抗体，NO与iNOS的诱导依然不受影响。

与LPS相比，ODN1826的激活动力学明显延迟。时间脉冲实验显示，RAW264.7需要至少8小时的持续暴露才能被完全激活，而LPS仅需1小时。这种延迟源于NF-κB通路的慢速启动：IκBα降解在ODN1826刺激后45分钟才出现，而LPS刺激后15分钟即可检测到。此外，氯喹（内体酸化抑制剂）能完全阻断ODN1826诱导的NO/iNOS产生，却不影响LPS效应，这证实了内体成熟是TLR9信号的必要前提。

更引人关注的是，ODN1826能诱导RAW264.7发生焦亡。18小时处理后，LDH释放显著增加，Western blot可检测到活化型caspase-11及GSDMD的N端剪切片段。机制上，ODN1826刺激产生的活性氧（ROS）是caspase-11-GSDMD轴激活的关键上游事件，使用ROS清除剂可显著抑制焦亡发生。这一发现为理解TLR9信号与细胞死亡模式的交叉提供了新视角。

2.2 B细胞增殖与分化

ODN1826是强效的B细胞丝裂原。在小鼠脾细胞培养中，0.01-0.1 nmol/200 μL（约0.5-5 μg/mL）即可达到最大增殖刺激，通过3H-胸腺嘧啶掺入法可清晰检测到剂量依赖性增殖曲线。当与IL-12共刺激时，ODN1826不仅促进B细胞进入细胞周期，还驱动其向浆母细胞（Blimp-1+ CD138+）分化，同时诱导IgG2c类别转换和IFN-γ自分泌，形成IL-12/IFN-γ正反馈环路。这种Th1偏向的体液免疫激活，正是ODN1826作为疫苗佐剂的核心细胞学基础。

2.3 树突状细胞成熟

在骨髓来源树突状细胞（BMDC）或原代脾DC中，ODN1826处理可显著上调MHC II、CD80、CD86等共刺激分子表达，促进DC成熟。深入机制研究表明，TLR9激活通过TRAF6-cGAS-STING轴增强自噬-溶酶体通路，提升溶酶体酸化程度和蛋白酶活性，从而增强抗原加工与呈递能力。这一通路在SLE等自身免疫病中过度活跃，但在肿瘤免疫中，正是DC成熟与T细胞启动的关键环节。

三、动物实验应用

3.1 肿瘤模型中的单药与联合应用

Lewis肺癌模型：腹腔注射0.05 mg ODN1826（第1、3、5、8、11、13天）可显著延迟肿瘤生长、降低瘤重并增加肿瘤细胞凋亡。当与分次放疗（12.5 Gy，2.5 Gy/次）联合时，增强比（SER）达到2.4，联合组肿瘤绝对生长延迟（ATGD）为4.4-6.0天，显著优于单药或单放疗。TUNEL检测显示联合组凋亡率可达28.17%，而对照组仅2.40%。血清TNF-α和IL-12水平升高、脾指数增加，提示免疫系统重建是增敏的关键。

B16黑色素瘤模型：在预防性疫苗实验中，MUC1-MBP融合蛋白联合50 μg ODN1826皮下免疫，可使70%小鼠在肿瘤攻击后80天仍存活，而对照组全部死亡；治疗性模型中，联合疫苗的50天存活率达60%，显著优于BCG佐剂组。机制上，ODN1826诱导了MUC1特异性IgG2c抗体、Th1细胞应答及CTL杀伤活性。

CT-26结肠癌模型：瘤内注射ODN1826（40 μg，第10、16天）与STING激动剂ADU-S100（20 μg）联合，可实现100%存活率和96%肿瘤抑制率，肿瘤体积从平均1952 mm³降至32 mm³。该联合策略还显著下调肿瘤微环境中α-SMA和Vimentin阳性癌症相关成纤维细胞（CAF），揭示了先天免疫激动剂对肿瘤基质的重塑能力。

肉瘤模型：在p53/MCA诱导的原位肉瘤中，瘤内注射ODN1826联合20 Gy放疗的抗肿瘤效应完全依赖于CD8+ T细胞——在Rag2-/-;γc-/-免疫缺陷小鼠中，联合治疗的肿瘤倍增时间与对照组无差异。

3.2 免疫佐剂与疫苗开发

ODN1826作为合成疫苗佐剂的潜力已在多个平台验证。在病毒样颗粒（VLP）递送系统中，ODN1826装载于27 nm VLP后，可增强肿瘤相关巨噬细胞的体内抗肿瘤活性。在MF59乳剂配方中，CpG 1826与M-M疫苗的组合通过延长抗原局部滞留时间，增强DC摄取和成熟，使预防性模型的70天存活率提升至80%。

3.3 血管与动脉粥样硬化研究

ODN1826在心血管研究中的角色具有双面性。在ApoE-/-小鼠中，皮下注射18 nM（约72 μg）ODN1826，每周3次持续7周，显著增加主动脉动脉粥样硬化斑块面积，伴随血管ROS生成增加和循环内皮微颗粒升高。急性血管损伤模型中，30 nM ODN1826每48小时注射（共4次）使颈动脉内皮再生受损54%，循环CD11b+促炎单核细胞增加，B细胞比例下降。这些结果表明，高剂量、重复给药的TLR9激活可驱动病理性血管炎症，为动脉粥样硬化机制研究提供了可靠模型。

3.4 系统性炎症与剂量效应

在C57BL/6J野生型小鼠中，静脉注射3-30 nM ODN1826可诱导剂量依赖性IL-6释放，30 nM达到峰值。皮下与静脉给药的血浆IL-6动力学相似。在急性损伤模型中，0.625-30 nM范围内，6.25 nM及以上剂量均显著损害内皮再生，提示存在明确的浓度-效应关系。值得注意的是，即使在30 nM高剂量下，小鼠仍无严重不良反应，体重、摄食饮水均无显著变化，显示出较宽的安全窗口。

四、联合策略的前沿探索

ODN1826的转化潜力在于联合用药。除前述的放疗增敏和STING协同外，与免疫检查点抑制剂的组合尤为亮眼：在B16-Ova双侧肿瘤模型中，瘤内注射30 μg ODN1826（第3、6、9天）联合系统性抗CTLA-4抗体（9H10，100 μg），可使44%小鼠的双侧肿瘤完全消退并长期存活，而任一单药的存活率不足10%。这种"原位疫苗"效应——即局部TLR9激活将注射肿瘤转化为免疫启动位点，配合检查点阻断解除T细胞抑制——已成为当前肿瘤免疫研究的热点范式。

此外，ODN1826与环磷酰胺联合可增加肿瘤相关巨噬细胞、DC、B细胞和细胞毒性T细胞的瘤内浸润，诱导长期肿瘤消退并建立免疫记忆。在纳米医学领域，ODN1826被整合进PLGA纳米颗粒、病毒样颗粒等递送系统，以改善其体内半衰期短、滞留时间不足的缺陷。

五、实验参数参考汇总

基于上述文献，以下为ODN1826的典型实验参数：

ODN1826（AbMole M9904）作为B类CpG ODN的代表，凭借其明确的小鼠TLR9选择性、全硫代骨架的稳定性，以及从细胞焦亡到系统性抗肿瘤免疫的广泛生物学活性，已成为免疫学、肿瘤学和心血管研究不可或缺的工具分子。从RAW264.7培养皿中的NO释放，到CT-26模型中CAF的消退，再到与放疗、检查点抑制剂联用的协同效应，ODN1826的应用版图仍在持续扩展。

产品信息：ODN 1826（目录号：M9904，CAS：202668-42-6）现货供应于AbMole，分子量6364.1，可溶于水（30 mg/mL），仅供科研使用。

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