问题答疑！mRNA-LNP如何评价粒径和Zeta电位？TRPS如何测量粒径、浓度、Zeta电位与颗粒亚群?

摘要： LNP药物开发过程中，平均粒径或平均Zeta电位只能描述颗粒群体的中心趋势，却可能掩盖不同尺寸、电荷和聚集状态的颗粒亚群。本文从LNP关键表征参数出发，解析可调电阻脉冲感应TRPS逐颗粒测量粒径、颗粒浓度和Zeta电位的基本原理，并结合空载LNP与mRNA-LNP应用结果，介绍单颗粒粒径与电荷分布在配方开发、核酸装载比较、储存稳定性和工艺变更研究中的应用，同时梳理Exoid与Pulsoid两类纳米孔分析平台的不同工作流定位。

关键词：LNP、脂质纳米颗粒、LNP表征、TRPS、可调电阻脉冲感应、单颗粒表征、Zeta电位、Exoid、Pulsoid、mRNA药物开发

脂质纳米颗粒（Lipid Nanoparticle，LNP）已经成为mRNA、siRNA和其他核酸药物递送研究中的重要纳米载体。随着LNP相关研发不断推进，粒径、颗粒浓度、Zeta电位、多分散性以及亚群构成等指标逐渐成为配方开发和质量评价中的重要参数。传统DLS等集合平均方法能够提供总体平均结果，但对于颗粒异质性较高的样品，一个平均粒径可能无法完整反映实际存在的亚群、聚集体和批次漂移，因此单颗粒分析为LNP研究提供了另一种观察颗粒群体的方式。IZON相关纳米颗粒表征技术资料可参考IZON纳米颗粒分析技术参考。

一、LNP表征需要重点关注粒径、浓度、Zeta电位与颗粒亚群

粒径会影响纳米颗粒的物理状态、细胞摄取和体内行为，是LNP配方开发和稳定性评价中的基础指标；颗粒浓度对应单位体积中的颗粒数量，可以用于比较不同工艺条件下的颗粒形成情况以及后续剂量和产能分析；Zeta电位反映颗粒表面滑动面附近的电学状态，与胶体稳定性和颗粒表面性质相关。

除了这三类参数，颗粒群体异质性同样值得关注。实际LNP体系中可能同时存在空载与载药颗粒、主要目标尺寸群体、较小颗粒以及聚集体。如果检测方法最终只输出一个平均数字，就难以回答不同颗粒群体分别占多少，以及工艺或储存条件变化后是否出现新的亚群。

二、TRPS技术通过纳米孔逐颗粒记录电阻脉冲

可调电阻脉冲感应（Tunable Resistive Pulse Sensing，TRPS）使用可调纳米孔进行颗粒分析。当LNP在压力和电场作用下逐一穿过纳米孔时，每一个颗粒都会暂时改变孔内离子电流，从而产生一次独立的阻塞脉冲。

脉冲幅度与颗粒体积相关，因此可以进一步得到单个颗粒尺寸；单位时间内出现的颗粒事件以及不同压力条件下的通量可用于颗粒浓度分析；颗粒通过纳米孔的运动行为还可以用于电泳迁移和Zeta电位测量。由于每一个脉冲对应一个独立颗粒，最终可以由大量颗粒事件建立完整粒径和电荷分布。

原始资料还提到，TRPS使用NIST溯源标准颗粒进行校准，以支持不同测量之间的标准化比较。Exoid相关TRPS测量范围覆盖约40 nm–11 µm粒径和10⁵–10¹¹ particles/mL颗粒浓度，并可应用于PBS、HEPES、MES、KCl等常见电解液体系。具体适用范围仍需根据纳米孔和实验条件确定。

三、单颗粒分辨率可以帮助识别复杂多峰样品

TRPS首先记录独立颗粒事件，因此可以直接构建粒径分布，而不是仅通过总体平均结果描述颗粒样品。在高度异质或具有多个尺寸亚群的颗粒体系中，这种机制可以帮助研究人员识别不同峰以及低丰度的较大颗粒群体。

对于LNP而言，这种亚群分辨能力可应用于聚集研究、不同制备批次比较以及配方调整前后的粒径群体变化观察。如果一个较低比例聚集体开始出现，即使平均粒径变化有限，完整粒径分布仍然可能提供额外信息。

四、单颗粒技术可以用于比较空载LNP与mRNA载药LNP

空载LNP和mRNA载药LNP的平均物理性质可能非常接近，但核酸装载仍可能改变颗粒内部结构和整个颗粒群体的尺寸、电荷表现。mRNA本身携带大量负电荷，被包封进入LNP后，颗粒群体的电学性质也可能随之发生变化。

TRPS能够分别获得颗粒粒径、真实颗粒浓度以及单颗粒Zeta电位分布，因此可以从多个维度比较空载和载药颗粒，而不只依赖两个平均值。

IZON公开应用数据显示，在Exoid上比较同一配方空载LNP和mRNA-LNP时，空载颗粒模态粒径约71 nm，而mRNA加载后的模态粒径约66 nm。该结果反映特定配方在核酸装载前后的颗粒群体变化，实际LNP体系是否出现类似变化仍需针对具体配方测量。

这类分析还可以用于储存稳定性研究，观察不同时间点是否出现新的聚集体；也可以用于批次比较，检查不同生产批之间的主峰和亚群比例是否保持一致，以及上游或下游工艺变化是否改变颗粒分布。

五、单颗粒Zeta电位可以从平均值进一步扩展到电荷分布

Zeta电位是颗粒滑动面附近的电位，可用于描述颗粒表面电学状态和辅助评价胶体稳定性。传统PALS等电泳光散射技术通常返回整个样品的综合平均Zeta电位，而单颗粒纳米孔测量可以根据每一个颗粒的电泳运动获得颗粒级数据，并最终形成Zeta电位分布。

对于LNP开发而言，完整分布能够回答平均值无法回答的问题，例如颗粒电荷范围有多宽，是否出现与主体明显不同的亚群，以及工艺调整之后整个电荷群体是否发生偏移。这类信息可作为配方筛选和稳定性研究的补充数据。

多模式颗粒实验进一步显示，单颗粒方法能够呈现不同亚群的电荷中心和分布宽度，而整体技术往往更偏向输出一个综合平均值。因此，对于颗粒表面修饰不均一或者制剂内部存在不同电荷群体的样品，分布信息可以帮助研究人员看到更多细节。

六、Exoid：偏向灵活方法开发与深入TRPS表征

Exoid基于TRPS和可调聚合物纳米孔，研究人员可以根据颗粒尺寸和样品特点选择不同纳米孔并调整实验条件。原始资料中，其粒径和颗粒浓度测量范围分别约为40 nm–11 µm和10⁵–10¹¹ particles/mL，可用于LNP、细胞外囊泡及其他不同类型纳米颗粒。

由于具备较高测量参数灵活性和单颗粒Zeta电位分析能力，Exoid更加适合配方研发、复杂颗粒体系研究、方法建立和需要深入亚群信息的实验场景。

七、Pulsoid：偏向快速和标准化的NPS颗粒检测

Pulsoid采用NPS技术和固态硅纳米孔芯片，整体工作流更加偏向快速、标准化和较高通量的颗粒尺寸与浓度测量。原始资料中给出的单样品测量时间约2–5分钟，颗粒浓度范围约为10⁹–10¹² particles/mL，并报告相应尺寸测量结果与TEM具有99.7%的一致性。

因此，Exoid和Pulsoid对应不同工作流需求。前者更加关注灵活的TRPS方法和深入单颗粒分析，后者更加关注快速、标准化以及较高频次的颗粒尺寸和浓度检测。具体设备和检测方法选择，应结合研发深度、样品数量、颗粒浓度和最终分析目标确定。

八、总结

LNP表征从平均粒径逐渐走向颗粒亚群分析，本质上反映了纳米药物研发对样品异质性认识的深化。平均粒径、平均Zeta电位仍然具有重要价值，但它们主要描述颗粒群体中心趋势，不能完全说明样品内部是否存在不同尺寸、电荷或者聚集状态的颗粒群体。

TRPS通过逐颗粒脉冲检测，可以同时获取颗粒粒径、颗粒数量及相关单颗粒电学信息，从而进一步构建粒径和Zeta电位分布。对于LNP配方筛选、mRNA装载比较、储存稳定性、批次一致性以及工艺变更研究，这类单颗粒数据可以作为平均技术之外的重要补充，使研究者不仅知道“平均是多少”，还能够进一步了解“这批颗粒究竟由哪些群体组成”。

拓展阅读

IZON LNP、TRPS与纳米颗粒单颗粒分析技术资料参考

IZON外泌体与纳米颗粒纯化表征技术专栏

关于技术来源

本文基于IZON Science公开LNP、TRPS、NPS、Exoid及Pulsoid相关技术资料，曼博生物MineBio整理，仅用于科研信息分享和纳米颗粒表征方法参考。文中关于仪器检测范围、空载与载药LNP粒径、检测时间、颗粒浓度范围及相关对比结果均来源于对应公开资料或特定应用数据，实际结果会受到样品组成、颗粒尺寸、浓度、缓冲体系、纳米孔及检测参数影响，应针对具体LNP配方和分析目的进行方法验证。
本文围绕IZON Science、Exoid、Pulsoid、TRPS、NPS、LNP表征、单颗粒粒径、颗粒浓度、Zeta电位和颗粒亚群等方向整理相关公开技术信息。